技术领域 [0001] 本发明涉及透明质酸产生促进剂。 背景技术 [0002] 近年来,预防皮肤老化的研究已广泛进行。 衰老是皮肤衰老的重要原因,但除此之外,干燥、氧化、紫外线的影响也可作为与皮肤衰老相关的直接因素。 皮肤老化的具体现象是已知的,例如包括透明质酸在内的粘多糖的减少、胶原蛋白的交联反应以及紫外线引起的细胞损伤。 [0003] 这里,透明质酸广泛存在于皮肤、关节、韧带、肺、肾、脑等器官和组织中。 特别是,对于皮肤而言,由于其高保湿性而成为维持水分的重要因素(非专利文献1)。 另外,已知透明质酸在皮肤中的存在量占全身的50%(非专利文献2)。 [0004] 作为补充减少的透明质酸的方法,提出了从口腔直接口服透明质酸或通过皮肤透皮吸收透明质酸。 有报告称,口服摄取的透明质酸被肠道细菌还原为低分子,然后从肠道吸收并在皮肤中再合成(参见非专利文献3)。 另一方面,在透皮吸收的情况下,已知透明质酸由于分子量高而不会被皮肤吸收。 然而,透明质酸的保水特性防止皮肤干燥的效果已得到证实。 现有技术文献 [0005] Papakonstantinou E.,:透明质酸:皮肤老化的关键分子,Dermatoendocrinol, 4(3), 253-8, 2012T。 C. Laurent 和 J. R. Fraser,“Hyaluronan”,FASEB J,Vol.6,第 2397-2402 页,1992 Mamoru Kimura,口服透明质酸的吸收,功能食品研究 14:30-35,2018 需要解决的挑战 [0006] 然而,一般透明质酸的分子量据说为80万至120万。 然而,非专利文献3中使用的透明质酸的分子量为30万,比一般的透明质酸的分子量小。 因此,尚不清楚即使分子量增加是否也会发生类似的分解和再合成。 另外,非专利文献3的结果是来自大鼠的结果,尚不清楚在人类中是否观察到相同的行为。 此外,尚不清楚有多少分解的透明质酸用于再合成。 同样,即使直接口服玻尿酸,是否能补充减少的玻尿酸也仍不清楚。 [0007] 考虑到上述问题做出了本发明。 即,本发明的目的在于,与通过直接口服摄取透明质酸来补充透明质酸的减少的方法不同,提供一种通过摄取促进透明质酸产生的物质来间接补充透明质酸的减少的方法。它作为 解决问题的手段 [0008] 本发明人研究了是否存在促进透明质酸产生的物质。 另外,新发现通过消耗异甘草素可以促进透明质酸的产生,从而完成了本发明。 [0009] 为了解决上述课题,本发明的特征在于,是以异甘草素为有效成分的透明质酸产生促进剂。 另外,优选还含有花生酸作为有效成分。 [0010] 根据该配置,促进了透明质酸的产生,因此可以补偿透明质酸的减少。 发明效果 [0011] 根据本发明,可以通过间接方法补充减少的透明质酸。 因此,减少的透明质酸可以通过与直接摄取不同的方法来补充,其效果目前尚未完全阐明。 除了预防因透明质酸减少引起的皮肤老化外,还可以期待改善与透明质酸相关的其他器官中随着透明质酸减少而出现的症状。 具体实施方式 [0012] (实施发明的形式) [0013] 本发明中所说的透明质酸产生促进剂可以是具有促进透明质酸产生作用的任意药剂,其特征在于至少含有异甘草素作为有效成分。 另外,如果需要,可以包含花生酸作为活性成分。 [0014] 这里,本发明中使用的“异甘草素”是自然界中存在的有机化合物的一种,已知作为草药的一种的甘草的成分之一含有。 本发明中使用的异甘草素可以从天然产物中提取和纯化,或者可以是工业化学合成的。 [0015] 然而,没有文献描述摄入异甘草素时的吸收率,异甘草素的有效浓度也不清楚。 然而,由于芝麻素(同为黄酮类化合物)的吸收率是已知的,因此可以根据芝麻素在一定程度上对其进行估计。 据了解,口服25mg芝麻素时,血浆中芝麻素浓度可达2ng/mL。 由此,假设异甘草素的吸收速度与芝麻素相同,则本发明中,异甘草素的日摄入量优选为0.001~3.5g,更优选为0.01~3.0g。为0.03至1.8克。 [0016] 异甘草素可以作为固体使用,或者可以溶解在溶剂中并作为液体使用。 溶剂包括氢氧化钠水溶液、乙醇、DMSO等,其中优选氢氧化钠水溶液或乙醇。 本发明中,从操作性的观点出发,优选溶解于氢氧化钠水溶液中使用。 [0017] 本发明中使用的“花生酸”已知为花生油中含有的饱和脂肪酸。 另外,已知可以通过氢化花生四烯酸来生产花生酸。 本发明中使用的花生酸可以从天然产物中提取和纯化,或者可以是工业化学合成的。 [0018] 与异甘草素一样,花生酸的有效浓度尚不清楚。 然而,与异甘草素一样,如果以脂肪酸EPA和DHA为基础,则可以粗略地估计花生酸的吸收率。 假设花生酸的吸收率为EPA和DHA的平均值,则本发明中,花生酸的日摄入量优选为0.001~10.0mg,更优选为0.005~5.0mg,更优选为0.01mg。它是〜3.3毫克。 [0019] 花生酸可以作为固体使用,或者可以溶解在溶剂中并作为液体使用。 作为溶剂,可以举出甲醇、乙醇、丙醇等醇类、醚类、氯仿等,其中优选醇类。 本发明中,从操作性的观点考虑,优选溶解于乙醇中使用。 [0020] 本发明的透明质酸产生促进剂的形态可以是固体或液体,可以根据本发明的透明质酸产生促进剂的使用形态任意选择。 [0021] 另外,本发明的透明质酸产生促进剂可以掺入饮食品中来使用。 例如,可用于发酵乳、乳酸饮料、黄油等乳制品、蛋黄酱等加工蛋制品、黄油蛋糕等糖果、面包等。 此外,还可适用于方便面、饼干等加工食品。 除上述以外,还可以根据需要添加适当的载体和添加剂制成制剂形式(例如粉剂、颗粒剂、胶囊剂、片剂等)。 [0022] 除了一般的饮料和食品之外,本发明的透明质酸产生促进剂还可用于包含在特定保健目的的食品、营养补充剂、具有功能要求的食品等中。 [0023](例子) [0024] 下面对本发明进行更详细的说明,但本发明并不限于此。 在本实施例中,使用培养细胞评价透明质酸的产生能力。 [0025] (试剂的制备) [0026] 首先,进行试剂的制备。 首先,使用0.1N氢氧化钠水溶液将异甘草素(东京化成工业株式会社制造)溶解至10mM。 随后,使用95%或更高浓度的乙醇将花生酸(由SIGMA制造)溶解至10mM。 [0027] (培养细胞的制备) [0028] 接下来,制备培养细胞。 本实施例使用正常人真皮成纤维细胞 (NHDF) 进行。 首先,使用含有10%未同化FBS(Biowest制造)和青霉素-链霉素(Invitrogen制造)的DMEM(Gibco制造的Dulbecco改良Eagle培养基),将NHDF保存在37℃和5%CO2下。 ₂ 有条件培养。 并且,在 24 孔板中,1.0×10 ⁵ 接种 NHDF 细胞以达到细胞/孔。 然后,在上述培养条件下培养72小时。 [0029] (透明质酸产生能力评价试验) [0030] 细胞培养后,将培养上清液更换为不含FBS的DMEM。 接下来,添加用PBS(Gibco制造的PBS(-)pH 7.4)系列稀释的异甘草素和花生酸,分别至最终浓度为0.001μM、0.01μM、0.05μM、0.1μM和1μM。单独或混合化合物。添加相同浓度的溶液。 这里,与口服摄入不同,上述浓度与培养细胞情况下的吸收率无关。 因此,基于上述优选范围确定添加浓度。 [0031] 添加试剂后,37°C,5% CO ₂ 条件下培养24小时。 培养后,回收培养纸,使用Hyaluronan、DuoSet Kit(R&D Systems制)测定培养上清液中的透明质酸浓度。 另外,在本实施例中,以不添加试剂作为阴性对照(NC)。 以NC设为100%评价透明质酸生成能力。 [0032] 结果如表1所示。 [0033] [0034] 从表1也可以看出,当添加异甘草素时,在所有浓度下都确认了透明质酸产生的加速。 特别是,结果表明,在0.01至0.05μM时,生产促进能力较高。 接下来,当添加花生酸时,结果表明,在0.01μM以下和1μM时,生产促进能力较高。 即,暗示即使单独添加异甘草素或花生酸,也能够促进透明质酸的生成。 [0035] 接下来,确认异甘草素和花生酸的组合使用的效果。 由表1可知,在0.1μM以下的浓度下,与单独添加任意浓度的情况相比,透明质酸的生成得到促进。 特别是在0.01~0.1μM时,可以看出与单独添加时相比,促进透明质酸产生的能力更高。 [0036] 随后,检查了当使用异甘草素以外的化合物时促进透明质酸产生的能力。 该评价中使用了反式对香豆酸、甘草素和大豆黄酮。 这些物质具有与异甘草素或从苯丙氨酸开始到产生大豆苷元的代谢途径中出现的物质在结构上相似的特征。 [0037] 关于检查方法,除了将各试剂的终浓度调整为1μM以外,使用与上述试验相同的方法测定培养上清液中产生的透明质酸的量。 此时,不使用任何试剂作为阴性对照(NC),从添加各试剂产生的透明质酸量中减去NC中产生的透明质酸量,求得透明质酸产生量(ng/mL)。 )。 结果如表2所示。 [0038] [0039] 从表2的结果可以看出,即使比较具有相似化学结构的物质,ILG产生的透明质酸量也是最高的。 另外,在从苯丙氨酸开始到生产大豆黄酮的代谢途径中,表明当结构从ILG变为甘草素时,生产量减少。 [0040] 如上所述,表明本发明的透明质酸产生促进剂可以与直接口服透明质酸的方法无关地间接补偿透明质酸的减少。 因此,不仅可以防止由透明质酸减少引起的皮肤老化,还可以改善与透明质酸相关的其他器官中伴随透明质酸减少的症状。